Como DNA Cientistas Cut com enzimas de restrição
Os cientistas usam enzimas de restrição para cortar ADN em pedaços mais pequenos para que possam analisar e manipular o ADN com mais facilidade. Cada enzima de restrição reconhece e pode anexar a uma determinada sequência de DNA chamado de sítio de restrição.
Você pode pensar em enzimas de restrição tão pouco tesouras moleculares que deslizam ao longo do DNA e cortar a espinha dorsal do açúcar-fosfato onde quer que encontrar o seu local de restrição.
A figura mostra como uma enzima de restrição pode fazer um corte em uma peça circular de DNA e transformá-lo em um pedaço linear.
Algumas enzimas de restrição fazer um corte em linha reta através do backbone DNA, enquanto outros, como o mostrado na figura anterior, fazer cortes escalonados. As enzimas que fazem cortes escalonados deixar pedaços pequenos de ADN de cadeia simples nas extremidades dos fragmentos cortam. Os cientistas chamam esses pedaços de fita simples extremidades coesivas porque eles têm sequências complementares um ao outro e tendem a aderir entre si por ligações de hidrogénio.
Você pode obter duas peças diferentes de DNA para ficar juntos, se você cortá-los ambos com uma enzima de restrição que faz extremidades pegajosas. As duas peças tendem a prender um ao outro, tornando possível combiná-las numa ADN recombinante moleculethat tem de DNA a partir de duas fontes.
Um pedaço pequeno, linear de ADN virai é mostrada na figura a seguir. O ADN virai contém dois locais de restrição para as enzimas de restrição diferentes, chamadas EcoR1and HindIII.
As localizações dos sítios de restrição estão marcadas com setas na imagem do DNA viral. O comprimento de ADN é dada em kb, que corresponde a pares de quilobases. (Quilo significa mil, assim que um quilobases é de 1000 pares de bases de DNA.)
Se você usou apenas EcoR1 para cortar uma amostra que continha muitas cópias deste pedaço de DNA, quantos diferente pedaços de tamanho de DNA seria o resultado? Qual é o tamanho seriam eles? Se você cortar o DNA com apenas HindIII, o que iria resultar? E o que aconteceria se você cortar o DNA com ambas as enzimas?
Exemplo de corte do ADN com enzimas de restrição.Para perguntas 2-4, testar sua compreensão de enzimas de restrição usando as informações na figura a seguir para responder às perguntas.
Praticando com enzimas de restrição. Um pedaço circular de ADN, denominado plasmídeo, é de 80 kb de comprimento. As marcas nas plasmídeo indicam sítios de restrição para as enzimas EcoR1 e BamH1.Quais são os tipos de fragmentos de ADN que resultaria se fosse para cortar uma amostra de ADN contendo muitas cópias do plasmídeo mostrado na figura com a enzima de restrição EcoR1?
uma. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb
b. 1/2 1/2 20 kb, 60 kb
c. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb
d. Todos os 80 kb
Que tipos de fragmentos de DNA resultaria se fosse para cortar o plasmídeo mostrado com ambas as enzimas de restrição, EcoR1 e BamH1?
uma. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb
b. 1/2 1/2 20 kb, 60 kb
c. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb
d. Todos os 80 kb
Que tipos de fragmentos de DNA resultaria se fosse para cortar o plasmídeo mostrado com a enzima de restrição HindIII?
uma. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb
b. 1/2 1/2 20 kb, 60 kb
c. 1/2 30 kb, 1/2 50 kb
d. Todos os 80 kb
A seguir estão as respostas para as questões práticas.
Se você cortar o DNA com apenas EcoR1, o ADN seria cortado no meio. Todas as peças seria o mesmo tamanho, o qual seria de 15 kb de comprimento.
Se você cortar o DNA com apenas HindIII, o ADN seria cortada na marca de 22,5 kb. Metade das partes de ADN seria de 22,5 kb de comprimento, e a outra metade seria de 7,5 kb de comprimento (30 - 22,5 kb kb = 7.5 kb).
Se você cortar o DNA com as duas enzimas de restrição, você terá dois cortes - um no ponto médio de 15 kb e o outro na marca de 22,5 kb. Assim, metade das peças seria de 15 kb de comprimento. A outra metade seria tudo 7,5 kb de comprimento (porque o corte de 22,5 kb seria bem no meio da segunda metade do DNA.)
A resposta é b. 1/2 20 kb, 1/2 60 kb.
EcoR1 iria fazer dois cortes em cada plasmídeo. Um fragmento seria o comprimento de 0kb a 20kb, que é 20kb- outro fragmento seria o comprimento de 20 kb a 80kb volta, o que é 60kb.
A resposta é um. 1/2 20 kb, 1/4 30 kb, 1/4 10 kb.
Se você cortar os plasmídeos com as duas enzimas de restrição, você pode acabar com quatro fragmentos por plasmídeo - dois 20kb de comprimento, um 30kb, e um 10kb.
A resposta é d. Todos os 80 kb.
Se se cortar o plasmídeo com a enzima de restrição corçaIII, você não iria receber quaisquer cortes, porque não existem quaisquer locais de restrição para esta enzima (enzimas de restrição são específicos para os sites que eles reconhecem).